Как проводится лабораторная диагностика анализы коклюша и паракоклюша

Как проводится лабораторная диагностика (анализы) коклюша и паракоклюша?

Как проводится лабораторная диагностика анализы коклюша и паракоклюша

Характерные приступы судорожного кашля с протяжными выдохами не всегда присутствуют у детей, получивших прививки, например, АКДС. Поэтому врачи и родители рассчитывают, что анализ на коклюш расставит все точки над «и». Заразная болезнь особенно тяжело протекает у детей первого года жизни. Инкубационный период составляет в среднем 1–2 недели, начальные симптомы напоминают ОРВИ.

Биологические особенности бактерий, вызывающих коклюш и паракоклюш

Род Bordetella объединяет 9 видов бактерий, из которых сильными патогенными свойствами обладают B. pertussis и B. parapertussis — соответственно возбудитель коклюша и паракоклюша (коклюшеподобной инфекции).

Это грамотрицательные, аэробные коккобациллы. Патогенные свойства B. pertussis связаны с выделением коклюшного токсина белковой природы.

Токсичные вещества бактерий в инактивированной форме включают в состав коклюшных вакцин.

Оптимальная температура выращивания культуры бордетеллы при бактериологическом посеве составляет 35°C. Возбудитель коклюша размножается на специальной среде картофельно-глицеринового либо казеиново-угольного агара.

Через несколько дней возникают колонии, имеющие выпуклую форму, с серебристой поверхностью. По мере хранения выделенных штаммов проявляется изменчивость, прежде всего, меняются иммуногенные свойства возбудителя.

В каких случаях назначают лабораторные исследования

Перед тем, как сдавать анализ на коклюш, необходимо учесть, что симптомы интоксикации не проявляются сразу же после заражения. Затем усиливается ночью и по утрам приступообразный кашель. Лицо больного ребенка краснеет, периодически возникают характерные для коклюша вдохи. Завершается такой приступ отхождением вязкой мокроты либо рвотой.

Периодичность течения заболевания

Названия периодаПродолжительностьПризнаки и симптомы
ИнкубационныйОт дней до 14 суток (в среднем — одна неделя)
ПредсудорожныйОт трех дней до двух недельСухой навязчивый кашель. Температура нормальная
СудорожныйОт двух недель до двух месяцев и болееХарактерные шумные вдохи во время судорожного кашля. Отхождение мокроты или рвота после приступа
Обратное развитиеОт двух недель до двух месяцевКашель становится редким. Самочувствие ребенка улучшается
Поздняя реконвалесценция(выздоровление)От двух до шести месяцевПриступообразный кашель возникает только при нагрузках, волнении, других заболеваниях

Лабораторный посев и ПЦР-исследование обычно назначают в предсудорожном периоде, когда еще нет специфических вдохов при кашле. Учитываются при этом такие диагностические признаки коклюша, как непосредственные контакты с больным человеком в детском саду, школе или семье. Врач, направляя ребенка на бактериологический посев и ПЦР, также смотрит на результаты общего анализа крови.

Лабораторная диагностика коклюшной инфекции у детей

Врачи выбирают алгоритм исследования в зависимости от возраста маленького пациента, длительности проявления симптомов заболевания, вакцинального статуса. Основной метод лабораторной диагностики — бактериологический анализ на коклюш и паракоклюш. Флюорографию назначают для исключения заболевания с похожими симптомами (острый бронхит, воспаление легких, плеврит).

Специалист в первую очередь обращает внимание на клиническую картину при осмотре ребенка, опрашивает родителей. Врач назначает исследования, способные подтвердить диагноз, при отсутствии явных симптомов заболевания.

Ценный материал для педиатра дает результат анализа на коклюш в «Инвитро» (диагностическом центре). Высокий уровень лабораторной диагностики позволят определить степень тяжести заболевания, выявить осложнения инфекции.

От правильного определения примерного срока инфицирования зависит выбор специалистами лабораторных тестов.

Какие анализы сдавать для диагностики возбудителя коклюша и паракоклюшной инфекции

  1. Мазок из глотки — позволяет выделить культуру бактерий с помощью микробиологического посева.
  2. Иммуноферментный анализ крови — метод ИФА для определения антигенов и антител.
  3. Полимеразная цепная реакция — тест ПЦР для выделения ДНК возбудителя.

Примерная схема лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша

Методы1–2 недели от начала заболевания3–4 неделиСвыше 4 недель
КатегорииБез лечения антибиотикомНа фоне антибиотикаБез лечения антибиотикомНа фоне антибиотикаБез лечения/с лечением
Непривитые дети до 1 годаБак. посев, метод ПЦРПЦРБак. посев, метод ПЦРПЦР, серологияСерология
Непривитые дети старше 1 годаБак. посев, метод ПЦРПЦРПЦР, серология, бак. посевСерологияСерология
Привитые дети, подросткиМетод ПЦР, бак. посевПЦРПЦР, серологияСерологияСерология

Получение результата бактериального посева занимает несколько дней. Между тем, экспресс-тест ПЦР дает возможность расшифровать диагноз спустя всего несколько часов.

Информативность вышеперечисленных методов диагностики выше у невакцинированных детей. После четырех недель прямые тесты уже не столь эффективны для выделения и определения возбудителя коклюша.

Серология позволяет уточнить картину в поздние периоды заболевания даже у ранее вакцинированных детей.

Бактериологическое исследование

Медперсонал берет мазок у детей с задней стенки глотки, далее высевает на питательную смесь в специальных лабораторных емкостях, где происходит развитие микробов в течение нескольких дней.

Готовый материал тщательно изучается под микроскопом, чтобы выделить колонии B. pertussis или B. parapertussis.

Бактериологическое исследование рассчитано на то, что в начале заболевания бактерии находятся в глотке и носовой полости.

Бактериологический посев считается «золотым стандартом» диагностики коклюшной инфекции у детей.

Микробиологический посев с последующим микроскопическим исследованием при коклюше позволяет диагностировать либо исключить инфекцию. Если результаты анализа положительные, то необходимо начать адекватное лечение и профилактику осложнений. Однако бактериологическое исследование малодостоверно на фоне терапии антибактериальными средствами.

Забор материала тампоном из глотки доставляет незначительный дискомфорт взрослому, но малыши обычно сопротивляются и капризничают.

Для такого случая предусмотрен вариант забора слизи для исследования из носа. Перед тем, как сдать анализ, рекомендуется не полоскать горло, не чистить зубы, не закапывать лекарства в нос.

Необходимо, чтобы в глотке и в носовой полости накопилась мокрота с возбудителем заболевания.

Пцр и серология при коклюше

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — исследование бактериальной ДНК. Метод ПЦР позволяет диагностировать коклюш на молекулярно-генетическом уровне. Биологический материал получают при заборе мокроты больного коклюшем. Метод полимеразной цепной реакции часто используют при отрицательных результатах бактериологического исследования.

Лабораторный иммуноферментный анализ подходит для периода заболевания, когда в организме уже вырабатываются антитела. Методика ИФА основывается на качественном определении антигенов и специфических антител в кровяной плазме. Наличие иммуноглобулинов М характерно для самого заболевания, а иммуноглобулины G циркулируют в крови уже после перенесенной инфекции.

Если антител к антигенам возбудителя в анализе крови на коклюш не обнаружат, то ребенок не болен и не перенес инфекцию ранее.

Серологический тест может назначаться для ретроспективной диагностики коклюша, выявления очага инфекции и предупреждения ее распространения. Расшифровка результата покажет в крови больных и переболевших детей повышение уровней специфических иммуноглобулинов М и G к токсинам бактерий Bordetella.

Общий анализ крови при коклюше указывает на наличие либо отсутствие воспалительного процесса в организме ребенка. Заболевание коклюшем можно заподозрить при повышенном количестве лимфоцитов и лейкоцитов, при этом показатели СОЭ будут в норме. Врачи рекомендуют сдавать кровь на анализ в утренние часы, перед завтраком.

Лечение коклюша в РФ включено в программу ОМС, в государственных медучреждениях проводят все необходимые мероприятия. Альтернативная возможность обследования — обращение в диагностические центры «Инвитро». Врач-консультант лаборатории объяснит назначение каждого анализа, даст его подробную расшифровку.

Как проводится лабораторная диагностика (анализы) коклюша и паракоклюша? обновлено: Май 17, 2016 автором: admin

Источник: http://ZdorovyeDetei.ru/infekcii/kak-provoditsya-laboratornaya-diagnostika-analizy-koklyusha-i-parakoklyusha.html

Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша

Как проводится лабораторная диагностика анализы коклюша и паракоклюша

[40-170] Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша

1090 руб.

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде – Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев).

Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз.

Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами.

В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %.

Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает.

Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов.

У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней.

Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша.

Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах.

Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

  • Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
  • Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
  • Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
  • Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
  • При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
  • При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

Референсные значения

1. anti-Bordetella pertussis

Результат: отрицательный.

Титр: 1:80 – условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Результат: отрицательный.

Титр: < 1:80 - условно-диагностический титр.

3. Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

  • коклюш;
  • паракоклюш;
  • транзиторное носительство;
  • иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие коклюша/паракоклюша;
  • неэффективная вакцинация против коклюша;
  • снижение иммунологического ответа после вакцинации;
  • ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

  • Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
  • применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
  • особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
  • предшествующая вакцинация.



Важные замечания

  • При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
  • Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

  • Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
  • Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Литература

  1. Ghanaie RM, Karimi A, Sadeghi H, Esteghamti A, Falah F, Armin S, Fahimzad A, Shamshiri A, Kahbazi M, Shiva F. Sensitivity and specificity of the World Health Organization pertussis clinical case definition / Int J Infect Dis. 2010 Dec;14(12):e1072-5.
  2. Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
  3. Piekarska K, Rzeczkowska M, Rastawicki W, Dąbrowska-Iwanicka A, Paradowska-Stankiewicz I.Usefulness of laboratory methods in diagnosis of pertussis in adult with paroxysmal cough / Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
  4. Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.
  5. Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
  6. Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша. – Методические рекомендации МР 3.1.2.0072-13.

Источник: https://helix.ru/kb/item/40-170

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.